IVT mRNA

蛋白质在人体正常生命活动中的作用举足轻重,蛋白质执行包括呼吸、移动、思考、免疫反应以及其他您可以想到的所有生命活动。从理论上讲,所有蛋白质都可以作为靶标,在体外转录下表达mRNA用于疾病治疗。体外转录的mRNA(IVT mRNA)非常敏感,易被核酸酶降解,这一特性限制了mRNA对转染和治疗应用的适用性。多聚腺苷酸尾(poly(A) tail)和5' 端帽子(cap)结构有助于提高mRNA的稳定性。5’ 非编码区(5’-UTR)和3’ 非编码区(3’-UTR)包含调节mRNA稳定性和翻译所必需的特定调控序列(regulatory sequence)。

IVT mRNA加上mCAP、ARCA或Cap1结构以提高翻译效率。

通过加上修饰的核苷酸(5me-CTP和ψUTP或5mo-UTP)和多聚腺苷酸尾(poly(A) tail),降低宿主细胞的免疫反应并提高稳定性。

合成mRNA后用DNase降解DNA模板。

用磷酸酶去除mRNA末端的5'三磷酸,以进一步减少哺乳动物细胞的先天免疫应答。

采用强大的净化旋转柱系统和HPLC纯化以可提高mRNA的产率,合成的mRNA可用于大多数下游应用。

Fig-3.1.jpg