近日，来自上海交通大学医学院的徐颖洁、樊雪梅团队利用化学修饰核苷酸，结合脂质纳米颗粒（LNP）递送系统研发出一款有效改善血小板数量异常减少状况的TPO mRNA-LNP。该制剂进入体内后能够选择性地积聚于肝细胞间隙，转染肝细胞，高效翻译具有正常活性的TPO。这些TPO被分泌到细胞外，作用于巨核细胞上的TPO受体并激活巨核细胞，最终使网织血小板比率以及血小板计数升高。实验表明，TPO mRNA-LNP的促血小板生成作用与已知的TPO受体激动剂romiplostim相当，同时具有较高的安全性，有望用于治疗血小板减少症。该研究结果发表在国际期刊《Molecular Therapy: Nucleic Acid》上，题目为Chemically modified in vitro-transcribed mRNA encoding thrombopoietin stimulates thrombopoiesis in mice。

基于密码子优化的TPO mRNA模板，作者采用修饰核苷酸合成了多种TPO mRNA。比较发现，含有N1-甲基-假尿苷酸（m1Ψ）的TPO mRNA在小鼠肝细胞AML12和人胚肾细胞HEK293T中均显示出较高的表达水平。由于mRNA在循环系统中不稳定，容易被核糖核酸酶降解，作者将mRNA封装于LNP内，得到了半径约为100 nm、多分散指数在0.2-0.25内的TPO mRNA-LNP。该纳米颗粒不仅能高效转染HEK293T细胞、促进大量TPO分泌，还能通过静脉注射和肌肉注射途径进入体内、靶向肝脏。相对于肌肉注射，静脉注射效果更好，递送的mRNA在高效翻译后也能被迅速清除。

Expression of TPO mRNA and in vivo biodistribution of Fluc mRNA

对成年小鼠静脉注射TPO mRNA-LNP能够呈剂量依赖性地提高其体内的血浆TPO浓度，该指标在药物注射6小时后达到峰值，高出生理水平2000多倍。相应地，TPO mRNA-LNP在静脉注射2、3天后即可显著提升网织血小板比率和血小板计数，这些指标数值分别在第6天和第10天回落至初始水平。与已知的TPO受体激动剂romiplostim相比，TPO mRNA-LNP在滞后时间、最大疗效和疗效持续时间方面十分相似。

为了评估TPO mRNA-LNP的疗效，作者通过静脉注射或皮下给药的方式给小鼠注入R300来快速地或逐步地清除血小板，从而分别建立了急性和慢性血小板减少症小鼠模型。在上述两个疾病模型中，静脉注射TPO mRNA-LNP均能提高血小板计数。在慢性模型中，TPO mRNA-LNP还显示出与romiplostim相当的疗效，明显优于同剂量的重组TPO的疗效。

Therapeutic efficacy of TPO mRNA-LNPs in mouse thrombocytopenia models

在多次给予TPO mRNA-LNP后，作者摘取了小鼠的心脏、肝脏、脾脏和肾脏进行组织学检查，没有发现任何异样。而且，多次给药也不会诱导机体产生针对TPO的抗体。此外，由于静脉注射的TPO mRNA-LNP主要分布于肝脏，作者还对天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）的血清浓度进行了考察，发现TPO mRNA-LNP并不会明显改变这些指标的数值、对肝功能影响不大。